Принцип методу тонкошарової хроматографії

Принцип методу

Метод тонкошарової хроматографії народився з паперової хроматографії і перші досліди стали проводитися в 80-х роках 19 століття. Активне ж використання цього аналізу почалося тільки після 1938 року.

Методика ТШХ включає в себе рухому фазу (елюент), нерухому фазу (сорбент) і аналізоване речовина. Нерухома фаза наноситься і фіксується на спеціальній пластинці платівці. Пластина може бути виготовлена зі скла, алюмінію або пластику - це багаторазові підкладки, які після кожного використання необхідно ретельно мити, просушувати і готувати для нанесення сорбенту. Також можливе використання паперових пластин, які утилізуються після використання.

В якості нерухомої фази найчастіше використовують силікагель, але можливе застосування та інших сорбентів, наприклад, оксиду алюмінію. При використанні того чи іншого сорбенту потрібно точно дотримуватися технологію, щоб результат був точним, наприклад, так силікагель може видати некоректний результат, якщо повітря в лабораторії занадто вологий.

В якості рухомої фази використовуються розчинники, наприклад, вода, оцтова кислота, етанол, ацетон, бензол. До вибору розчинника потрібно поставитися відповідально, тому що від його якостей (в`язкості, густини, чистоти) безпосередньо залежить результат хроматографії. Для кожного аналізованого зразка підбирається індивідуальний розчинник.

Проведення аналізу

Зразок необхідно розвести в розчиннику. Якщо повного розчинення не відбувається і залишається занадто багато домішок, то можна провести очищення зразка методом екстракції.

Нанесення зразка на пластину може бути вироблено автоматично або вручну. При автоматичному нанесенні використовується спосіб мікрораспиленія, коли кожен зразок спреєм наноситься на відповідну ділянку підкладки. Для ручного нанесення використовується мікрокапіляр. На платівці олівцем ставляться мітки для кожного зразка. Кожен зразок за допомогою капіляра наноситься на пластину в одну лінію на достатній відстані від міток, щоб не вступити в реакцію з вуглецем з грифеля.

Пластина поміщається в посудину, на дні якого налитий елюент. Підкладка поміщається одним краєм у посудину до зазначеної лінії. Посудину щільно закривають, щоб уникнути випаровування рухомої фази. Під дією капілярних сил елюент починає підніматися вгору по шару сорбенту. Коли елюент досягає певного рівня, пластину виймають з посудини і висушують.

Якщо шукане речовина не має кольору, то на підкладці його видно не буде. Тому проводиться візуалізація - обробка пластинки парами йоду або іншими барвниками.

Після такої обробки проводиться оцінка результату. На сорбенте проявляються забарвлені ділянки тієї чи іншої інтенсивності. Для визначення речовини (або групи речовин) забарвлені ділянки, їх розмір, інтенсивність і рухливість порівнюють з еталонним зразком.

Метод ТШХ отримав широке застосування, тому що він швидкий, дешевий, точний, наочний, не вимагає складного обладнання, легко інтерпретується.